표지 키트에 관한 자주 묻는 질문과 답변
Q1:저분자 색소 표지 키트로 표지가 가능한 항체 및 단백질의 종류는 무엇인가요?
A:다른 종류 생물 유래의 범용 IgG 항체는 표지가 가능합니다. IgM 항체의 경우 색소 사용량 또는 표지 완충액을 적절히 조정하면 표지가 가능합니다. IgY, IgD, IgA 등 다른 항체 유형에 대해서는 검증이 되지 않았지만, 항체 또는 단백질에 유리 제1급 아미노기가 존재하는 한 이론적으로 표지가 가능합니다.
Q2:표지 대상물에 관한 주의점은 무엇인가요?
A:표지 대상물에는 유리 제1급 아미노기 또는 N-말단이 필수입니다. 시료 내에 Tris, 글리세롤, 단백질 또는 아미노기를 가진 시약이 포함되어서는 안 됩니다.
Q3:소량 또는 미량 표지（예：항체 단백질 10μg 미만）는 가능한가요?
A:현재 매뉴얼에 기재된 방법은 0.02～2mg 항체 표지용입니다. 소량 표지가 필요한 경우 맞춤화 또는 표지 서비스를 제공해드릴 수 있습니다. 또한 장기적으로는 항체 단백질 10μg 미만 표지용 키트를 출시할 예정입니다.
Q4:엽산/펩티드 등 물질을 본 표지 키트로 FITC/Fluor594 표지가 가능한가요?
A:물질에 유리 제1급 아미노기가 존재하는 경우 이론적으로 표지가 가능합니다. 단백질의 경우 제1급 아미노기（라이신）의 개수를 고려해야 합니다. 저분자 화합물의 경우 아미노기의 개수가 표지 가능 여부를 결정합니다. 엽산에는 함질소 복소환 상에 1개의 아미노기가 존재하므로 이론적으로 FITC 또는 Fluor594로 표지가 가능합니다. 다만 해당 아미노기의 친핵성이 비교적 약하기 때문에 표지 효율이 좋지 않을 수 있습니다. 또한 표지 물질의 분자량에 따라 적절한 한외여과 튜브를 정제에 사용해야 하며, 이에 대해서는 고객님께서 실험 목적에 따라 판단하셔야 합니다.
Q5:바이오틴/저분자 형광색소의 표지 효율（DOL）을 향상시키는 방법은 무엇인가요?
A:시도해볼 수 있는 방법은 여러 가지가 있습니다.
1) 반응계 내 색소와 단백질의 비율을 높입니다.
2) 반응계 내 단백질 농도를 높입니다.
3) 반응 온도와 시간을 적절히 연장합니다.
4) 표적 단백질용 표지 완충액을 변경합니다.
Q6:표지 효율이 높을수록 실험 결과가 좋아지나요?
A:아닙니다. 일반적으로 범용 IgG 항체의 경우 DOL이 2～9 범위에 있는 것이 가장 최적입니다. 이 범위를 초과하면 실험 결과가 보통 나빠집니다. 구체적인 실험 결과는 표지되는 단백질과 항체의 특성에 의존하므로, 실제 실험 결과를 바탕으로 최적 DOL을 결정해야 합니다.
Q7:저분자 색소 표지 후 재조합 단백질 농도를 정량화・측정하는 방법은 무엇인가요?
A:재조합 단백질 정량 방법으로는 BCA법, UV 흡광법, Bradford법, 쿠마시 브릴리언트 블루법, Lowry법 등 여러 가지가 있으며, 이 방법들을 이용해 단백질 농도를 측정할 수 있습니다. 또는 매뉴얼에 따라 흡광도를 측정하여 농도를 계산할 수도 있습니다. 각 방법에는 제한이 있으므로 고객님께서 실제 상황에 맞춰 적절한 측정 방법을 선택하실 수 있습니다.
Q8:바이오틴 표지 키트는 항체 외 다른 단백질 표지에 사용 가능한가요?
A:바이오틴 표지 키트의 원리는 활성화 바이오틴의 에스테르 결합이 표적 물질 상의 아미노기와 반응하여 안정적인 아미드 결합을 형성하는 것입니다. 또한 단백