IHC 시약의 일반적인 조성 (Common Immunohistochemistry (IHC) Reagent Formulations)
10% 중성 완충 포름알데하이드 (10% NBF)
포름알데히드 4% (w/v), 인산염 버퍼 0.01 M
조성 (1 L)
| 성분 | 양 |
|---|---|
| 40% 포름알데히드 원액 | 100 mL |
| NaH₂PO₄·H₂O (수인산수소이수소인산염) | 0.4 g |
| Na₂HPO₄ (이수소인산나트륨) | 0.65 g |
| 탈이온수 | 1 L 까지 첨가 |
pH:
7.2-7.4 (NaOH 또는 HCl 로 조절)
보관:
실온 1 개월; 4°C 에서 최대 3 개월
사용법:
조직 침지 후 24 시간, 그 뒤로 2 시간 동안流水 (running water) 세척
0.01 M 시트레이트 버퍼
트리나트륨시트레이트 10 mM, 구연산 1.8 mM
조성 (500 mL)
| 성분 | 양 |
|---|---|
| 0.1 M 트리나트륨시트레이트 | 9 mL |
| 0.1 M 구연산 | 41 mL |
| 탈이온수 | 500 mL 까지 첨가 |
pH:
6.0 ± 0.05
보관:
4°C 에서 1 개월
사용법:
섹션을 리트리벌 박스에 넣고, 121°C 에서 2 분 가열 (압력솜) 또는 98°C 에서 10 분 가열 (마이크로파), 이후 실온으로 자연 냉각
3% H₂O₂ 메탄올 용액
H₂O₂ 3% (v/v)
조성 (10 mL, 신선하게 준비)
| 성분 | 양 |
|---|---|
| 30% H₂O₂ | 1 mL |
| 메탄올 | 9 mL |
사용법:
실온에서 10 분간 인큐베이션 후, PBS 로 3 회 × 3 분씩 세척
주의: 이 시약은 사용 직전에 신선하게 준비해야 합니다.
5% 정상 혈청 (2 차 항체와 동일한 종에서)
혈청 5% (v/v)
조성 (1 mL)
| 성분 | 양 |
|---|---|
| 정상 혈청 | 50 μL |
| PBS | 950 μL |
사용법:
실온에서 30 분간 블록킹 (Block), 세척 없이 배수
PBS-BT
BSA 1%, Tween-20 0.05%
조성 (100 mL)
| 성분 | 양 |
|---|---|
| BSA (소량 단백질) | 1 g |
| Tween-20 | 50 μL |
| PBS | 100 mL 까지 첨가 |
보관:
4°C 에서 1 주 이내; 장기 보관 시 분할하여 -20°C 에 동결
사용법:
일차 항체와 2 차 항체를 이 용액으로 희석; 권장 시작 농도: 일차 항체 1:100, 2 차 항체 1:200
DAB-H₂O₂ 작업 용액
DAB 0.5 mg mL⁻¹, H₂O₂ 0.003%
조성 (5 mL, 신선하게 준비)
| 성분 | 양 |
|---|---|
| DAB 원액 (TB pH 7.6 에 50 mg/100 mL, 0.22 μm 필터링) | 5 mL |
| 30% H₂O₂ | 5 μL |
사용법:
조직에 도포하고, 현미경으로 관찰하면서 실온에서 1-5 분간 인큐베이션,流水 (running water) 로 정지
주의: 이 시약은 사용 직전에 신선하게 준비해야 합니다.
Harris 헐마토옥신
헐마톡신 0.4% (w/v), 수은 산화물 0.08%
조성 (500 mL)
| 성분 | 양 |
|---|---|
| 헐마톡신 | 2 g |
| 절대 에탄올 | 20 mL |
| 알루미늄 포타슘 황산염 | 40 g |
| 탈이온수 | 480 mL |
| 수은 산화물 | 1 g (완전 교반하면서 천천히 첨가) |
제조:
필터링 후 숙성 24 시간
보관:
실온, 갈색 병에서 최대 6 개월
사용법:
작업 용액을 탈이온수 1:1 로 희석 후 핵을 30 초-1 분간 염색,流水 (running water) 로 5 분간 파란색으로 전환
버퍼
PBS (0.01 M, pH 7.4)
| 성분 | 양 (1 L) |
|---|---|
| NaCl | 8.0 g |
| KCl | 0.2 g |
| Na₂HPO₄·12H₂O | 2.9 g |
| KH₂PO₄ | 0.2 g |
| 탈이온수 | 1 L |
제조:
멸균 후 실온 보관
TBS-T (0.05 M 트리스, 0.15 M NaCl, 0.05% Tween-20, pH 7.6)
| 성분 | 양 (1 L) |
|---|---|
| 트리스 기준 | 6.05 g |
| NaCl | 8.8 g |
| 탈이온수 | 900 mL → pH 7.6 로 조절 → 1 L 까지 추가 |
| Tween-20 | 0.5 mL |
마운팅 매질
중성 바잘름 (Neutral Balsam)
사용법:
탈수 과정 (70% → 80% → 95% → 100% 에탄올, 각각 2 분) 을 거쳐 클리어링 후 (xylene 2 회 × 3 분), 적절량의 중성 바잘름을 도포하고 커버글라스로 덮음
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제프 제프는 EnkiLife 의 병리학 제품 전문가로, 면역조직화학 연구 및 제품 개발에 12 년 이상 종사하고 있습니다. 그는 사용자의 요구 사항에 대한 깊은 통찰력을 가지고 있으며, 고객들이 면역조직화학 실험을 수행하고 과학적 발견을 가속화하는 데 헌신하고 있습니다. |
