문제 해결 가이드: ELISA
문제: 높은 배경 신호
| 원인 | 테스트 또는 대책 |
|---|---|
| 세척이 불충분합니다 | 세척 횟수를 늘리세요；세척 사이에 30초 담금 단계를 추가하세요 |
문제: 신호가 예상되지만 신호가 검출되지 않습니다
| 원인 | 테스트 또는 대책 |
|---|---|
| 시약 첨가 순서가 틀리거나 조제가 부적절합니다 | 분석을 반복하세요；계산을 확인하고 새 완충액, 표준품 등을 조제 프로토콜을 확인하세요 |
| HRP가 오염되었습니다 | 신선한 시약을 사용하세요 |
| 사용한 항체의 농도가 부족합니다 | 농도를 높이세요 |
| 표준품이 열화되었습니다 (샘플 웰에 신호가 있는 경우) | 표준품이 지시대로 취급되었는지 확인 새 바이알을 사용하세요 |
| FCS가 포함된 완충액으로 항체를 재구성했습니다 | 선택한 시약의 재적격 인정을 수행하세요 |
| 포획 항체가 플레이트에 결합하지 않았습니다 | ELISA 플레이트를 사용하세요 (조직 배양 플레이트가 아닙니다) 추가 단백질 없이 PBS로 희석하세요 |
| 완충액이 오염되었습니다 | 새 완충액을 조제하세요 |
문제: 신호가 과도합니다 - 플레이트 전체가 균일하게 파랗게 변했습니다
| 원인 | 테스트 또는 대책 |
|---|---|
| 세척 불충분 / 세척 단계 건너뜀 - 결합하지 않은 퍼옥시다아제가 잔류합니다 | 단계 사이에 충분한 세척을 보장하세요 |
| 기질 용액을 너무 일찍 혼합하여 파랗게 변했습니다 | 기질 용액은 혼합 후 즉시 사용해야 합니다 |
| 스트렙타비딘-HRP가 과량입니다 | 희석을 확인하고 필요한 경우 적정하세요 |
| 플레이트 실러 또는 시약 리저버를 재사용하여 잔류 HRP가 존재합니다. 이로 인해 TMB가 비특이적으로 파랗게 변합니다 | 각 단계마다 새 플레이트 실러와 시약 리저버를 사용하세요 |
| 금속 또는 HRP로 오염된 완충액 | 새 완충액을 조제하세요 |
문제: 표준 곡선은 얻었지만 포인트 간 식별성이 낮습니다 (낮거나 평평한 곡선)
| 원인 | 테스트 또는 대책 |
|---|---|
| 스트렙타비딘-HRP가 부족합니다 | 희석을 확인하고 필요한 경우 적정하세요 |
| 포획 항체가 플레이트에 충분히 결합하지 않았습니다 | ELISA 플레이트를 사용하세요 (조직 배양 플레이트가 아닙니다) 추가 단백질 없이 PBS로 희석하세요 |
| 검출 항체가 부족합니다 | 희석을 확인하고 필요한 경우 적정하세요 |
| 플레이트의 발색 시간이 불충분합니다 | 기질 용액의 배양 시간을 연장하세요 권장 브랜드의 기질 용액을 사용하세요 |
| 절차가 부정확합니다 | 일반 ELISA 프로토콜로 돌아가세요；변경 사항이 있으면 제거하세요 |
| 표준 곡선 희석 계산이 부적절합니다 | 계산을 확인하고 새 표준 곡선을 작성하세요 |
문제: 중복 샘플의 재현성이 낮습니다
| 원인 | 테스트 또는 대책 |
|---|---|
| 세척이 불충분합니다 | 자동 플레이트 세척기를 사용하는 경우 모든 포트가 깨끗하고 막힘이 없는지 확인하고 30초 담금 단계를 추가하며 세척 중간에 플레이트를 회전시키세요 |
| 절차 오류 또는 플레이트 품질 불량으로 인한 불균일 플레이트 코팅 (불균일하게 결합할 가능성이 있습니다) | 추가 단백질 없이 PBS로 희석하세요 코팅 및 블로킹의 부피, 시간, 시약 첨가 방법을 확인하세요. 사용한 플레이트를 확인하세요 ELISA 플레이트를 사용하세요 (조직 배양 플레이트가 아닙니다) |
| 플레이트 실러를 재사용했습니다 | 각 단계마다 새 플레이트 실러를 사용하세요 |
| 플레이트 실러를 사용하지 않았습니다 | 플레이트 실러를 사용하세요 |
| 완충액이 오염되었습니다 | 새 완충액을 조제하세요 |
문제: 분석 간 재현성이 낮습니다
| 원인 | 테스트 또는 대책 |
|---|---|
| 세척이 불충분합니다 | 자동 플레이트 세척기를 사용하는 경우 모든 포트가 깨끗하고 막힘이 없는지 확인하세요 |
| 배양 온도가 변동합니다 | 권장 배양 온도를 준수하세요 환경 조건이 변동하는 장소에서 플레이트 배양을 피하세요 |
| 프로토콜이 매번 변경됩니다 | 실행마다 동일한 프로토콜을 따르세요 |
| 플레이트 실러를 재사용하여 잔류 HRP가 존재해 TMB를 파랗게 만듭니다 | 각 단계마다 새 플레이트 실러를 사용하세요 |
| 표준 곡선 희석 계산이 부적절합니다 | 계산을 확인하고 새 표준 곡선을 작성하세요 내부 대조군을 사용하세요 |
| 완충액이 오염되었습니다 | 새 완충액을 조제하세요 |
문제: 신호가 예상되지만 신호가 검출되지 않고 표준 곡선은 양호합니다
| 원인 | 테스트 또는 대
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