형광 염료 또는 마커의 특성
우리는 분자량이 약 1000D 인 작은 분자 형광 염료 (일반적으로 Cyanine 계열과 Fluor 계열 염료를 지칭함) 를 다양하게 제공합니다. 이들은 다양한 검사 기기에서 사용되는 대부분의 검출 채널/필터에 적합하며, 많은 작은 분자 형광 염료가 다중 검출 (multiplex detection) 에 사용될 수 있습니다. 이 형광 염료 시리즈는 근 자외선, 가시광선 및 근 적외선 스펙트럼을 커버하여 일반적인 여기 광원 및 기기와 호환됩니다. 아래에서는 사용자가 형광 염료 항체 단백질 표지 키트, 형광 2 차 항체, 세포분획 분석 (flow cytometry) 항체 등을 선택하는 데 참고할 수 있도록 일부 염료에 대한 상세한 소개를 제공합니다.
형광 염료 특성 비교표
| 방출광 이름 | 염료 이름 | 일반적 용도 | Ex max/Em max | 대응/약간 유사한 스펙트럼 염료 |
|---|---|---|---|---|
| 파랑색 (Blue) | Fluor350 | IF 이미징 | 346nm/445nm | AMCA, Coumarin |
| 파랑 - 보라색 (Blue-Purple) | Fluor405 | FC, IF 이미징 | 400nm/424nm | |
| 초록색 (Green) | Cyanine2 | IF 이미징 | 490nm/510nm | |
| FITC | FC, IF 이미징 | 495nm/520nm | ||
| Fluorescein-X | FC | 495nm/519nm | ||
| Fluor488 | FC, IF 이미징 | 490nm/513nm | Cy2, Fluorescein-X，FITC (Fluorescein) | |
| 노랑 - 초록색 (Yellow-Green) | Fluor430 | IF 이미징 | 430nm/545nm | |
| Fluor532 | IF 이미징 | 530nm/555nm | ||
| 노랑색 (Yellow) | Cyanine3 | IF 이미징 | 548nm/563nm | |
| Fluor555 | IF 이미징 | 555nm/572nm | Cy3, TRITC (Rhodamine) | |
| 주황색 (Orange) | Fluor568 | IF 이미징, FC | 578nm/602nm | Rhodamine Red |
| Fluor590 | IF 이미징 | 590nm/620nm | ||
| Fluor594 | IF 이미지, FRET | 590nm/617nm | Texas Red | |
| Texas Red | Fluor647 | FC, IF 이미징 | 651nm/668nm | Cy5，APC |
| Cyanine5 | IF 이미지 | 646nm/662nm | ||
| Cyanine5.5 | IF 이미징, FRET | 675nm/694nm | ||
| 근적색 (Near Red) | Fluor680 | IF 이미지 | 680nm/702nm | Cy5.5, IR680 |
| Fluor700 | FC | 702nm/723nm | ||
| Fluor750 | IF 이미지 | 747nm/770nm | Cy7 | |
| Cyanine7 | IF 이미지，FRET | 750nm/773nm | ||
| Fluor770 | WB 형광 (Western Blot Fluorescence) | 770nm/790nm |
형광 염료 또는 마커의 특성 소개
Fluor350
Fluor350 은 짙은 파란색 형광 염료로서, coumarin 염료인 7-AMCA 골격에 기반한 수정된 염료입니다. 이는 AMCA 를 훌륭한 대안으로 사용할 수 있으며, 형광 이미징 및 세포분획 분석에서 일반적으로 사용되며 좋은 수용성과 pH 불감성을 가집니다. Fluor350 의 여기 스펙트럼과 방출 스펙트럼은 DAPI 에 매우 근접하며, DAPI 필터 세트를 사용하여 직접 이미지화할 수 있습니다.
적용 참고문헌:
- Rothschild, K. J.; Gite, S.; Olejnik, J. Newly synthesized proteins의 검출, 분석 및 분리 방법. U.S. Pat. Appl. Publ. US 20110250609,2011.
- Zauner, G.; Lonardi, E.; Bubacco, L.; Aartsma,T. J.; Canters, G. W.; Tepper, A. W. J. W. 트립토판 - 염료 형광 에너지 전달, 3 호형 구리 단백질 이용 산소 감지에 적용. Chem.- Eur. J. 2007, 13, 7085--7090.
- Gee, K. R.; Hart, C. CR.; Haugland, R.; Patton,W. F.; Whitney, S. 친화성 태그의 부위별 표지 방법. U.S. Pat. Appl. Publ. US.20060141554, 2006.
Fluor405
Fluor405 파란색 형광 염료의 여기/방출 최대값은 400/424nm 으로, 형광 현미경과 세포분획 분석에 널리 사용되는 405nm 보라색 레이저의 스펙트럼 선과 거의 완벽하게 일치합니다. Fluor405 의 여기 및 방출 스펙트럼은 BV421 염료와 높은 중첩을 보입니다. Fluor405 는 Cascade Blue 염료의 유도체이지만, 구조 수정 후 형광 특성이 최적화되었습니다. Fluor405 염료와 초록형광체 간의 스펙트럼 중첩은 최소화되어 다색 적용에 이상적인 선택이 됩니다.
적용 참고문헌:
- Jones SA, Shim SH, He J, Zhuang .살아있는 세포의 빠른 3 차원 초해상도 이미징.Nat Methods. 2011 Jun;8(6):499-508.
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Fluor430
400-450nm 파장 범위에서 빛을 흡수하는 활성 염료 중에서는 일반적으로 500nm 보다 높은 곳에서 유의미한 형광이 생성되지 않습니다. Fluor430 염료는 이 파장 범위의 공백을 메우며, 430nm 흡수 피크 근처에서 여기될 때 큰 스토크스 시프트와 강한 노랑 - 초록색 형광을 나타냅니다.
적용 참고문헌:
- Tsilivakos, V.; Gritzapis, A. 정자 세포 내 감염성 병원체 검출 방법. PCT Int.Appl. WO 2013144662, 2013.
- Arcangeli, A.; Becchetti, A.; Pillozzi, S.; Masselli,M.; De Lorenzo, E. 백혈병 형태의 화학 저항성 예방 및/또는 모니터링을 위한 방법 및 키트. PCT Int. Appl. WO 2011058509,2011.
- Lewis B, Rathman S, McMahon RJ. 비오틴화된 단백질의 검출 및 정량화. Storm 840 광 스캐너를 사용하여.J Nutr Biochem.2003 Apr;14(4):196-202.
Fluor488
Fluor488 은 황산화된 로다민 초록색입니다. 두 개의 황산 이온을 도입함으로써 Fluor488 은 수용성, pH 안정성 및 광안정성이 크게 향상되었습니다. 피치오신 염료와 달리, Fluor488 의 형광은 넓은 pH 범위 (4-10) 에서 변하지 않습니다. 여러 음전하를 갖는 특성으로 인해 분자간 응집이 적게 일어나며, 여러 염료 분자가 동일한 단백질을 표지할 때 형광 자체 소멸 또는 단백질 응집이 적게 발생합니다. Fluor488 은 피치오신 (FITC 또는 FAM) 과 CY2 의 훌륭한 대안이며, 생체 접합물의 단일 분자 검출, 형광 상관 분광법, 형광 편광 측정에서 매우 우수한 성능을 보입니다. 또한 형광 현미경과 세포분획 분석에 널리 사용됩니다. Fluor488 은 현재 가장 수용성 작은 분자 초록색 형광 염료 중 하나입니다.
적용 참고문헌:
- Karver, M. R.; Weissleder, R.; Hilderbrand, S. A. 생체 내 반응 쌍이 동시 선택적 다중 목표 이미징을 가능하게 합니다. Angew. Chem., Int.Ed. 2012, 51, 920--922.
- Lundberg, E.; Sundberg, M.; Graeslund, T.; Uhlen,M.; Svahn, H. A. 고체 상에서 소량의 항체의 재현성 있는 형광 표지를 위한 새로운 방법.J. Immunol. Methods 2007, 322,40--49.
- photostability 비교: Alexa Fluor 448 과 Alexa Fluor 647 와 기존 염료 FITC 및 APC 를 세포분획법으로.Int J Lab Hematol. 2018 Jun;40(3):e52-e54.
Fluor555
Fluor555 은 주황 - 적색 형광 염료로서, Cyanine3 의 아날로그로 주로 Cyanine3 과 TAMRA 염료를 대체합니다. Fluor555 염료는 높은 극성, 강한 수용성, 우수한 형광 밝기 및 안정성을 가지며, 단백질/항체 표지를 위한 좋은 염료입니다. 화학 구조적 관점에서 Fluor555 의 모핵은 Cyanine3 이지만, 모핵에는 최대 4 개의 황산산기 group 가 있습니다. 테트라황산산 구조는 극히 친수성이며, 염료가 단백질 표면에서 표지될 때 단백질 표면 극성을 변화시키지 않아 단백질의 소수성 응집 및 침전 위험을 줄이고, 염료의 국소 근접으로 인한 형광 소멸 확률을 크게 줄입니다. 따라서 Fluor555 로 표지된 단백질은 종종 더 강한 형광을 방출합니다. 그러나 현재 시장에 있는 대부분의 세포분획기는 전통적인 세포분획기 (스펙트럼 세포분획기가 아님) 이므로 레이저 호환성이 최적이지 않아, Fluor555 염료는 주로 형광 이미징 분야에서 사용됩니다.
적용 참고문헌:
- Arcangeli, A.; Becchetti, A.; Pillozzi, S.; Masselli,M.; De Lorenzo, E. 백혈병 형태의 화학 저항성 예방 및/또는 모니터링을 위한 방법 및 키트. PCT Int. Appl. WO 2011058509,2011.
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Fluor568
Fluor568 형광 염료는 561nm 레이저와 완벽하게 일치합니다. 이 주황 - 적색 형광 염료의 최대 여기/방출은 약 578/602nm 으로, 많은 공동 초점 레이저 스캔 현미경에 사용되는 561nm 다이오드 레이저에서 최적의 여기 효과를 달성할 수 있습니다. Fluor568 은 로다민 화합물의 모핵을 가지며, 두 개의 황산 이온이 도입되어 염료의 수용성과 광학적 특성을 최적화합니다. 여기될 때 밝은 주황 - 적색 형광을 방출하며, 매우 민감하고 안정적이며 저농도 표적을 검출하는 데 사용될 수 있습니다. 이는 훌륭한 수용성 작은 분자 형광 표지 염료입니다.
적용 참고문헌:
- Jafar Mahmoudian, Reza Hadavi, Mahmood Jeddi-Tehrani. Alexa Fluor 568 - 와 피치오신 이소시아나테 접합 항체의 광 소멸 및 광 안정성 특성 비교.Cell J. 2011 Fall;13(3):169-72.
- Seyed Nasser Ostad, Sepideh Babaei , Ali Ahmad Bayat. 유방암 세포 계통에서 R-Phycoerythrin-Streptavidin 과 Streptavidin-Alexa Fluor 568 의 광 소멸 비교.Monoclon Antib Immunodiagn Immunother. 2019 Feb;38(1):25-29.
- Tamás Gajdos , Béla Hopp.Hot-Band Anti-Stokes 형광 특성.Alexa Fluor 568.J Fluoresc.2020 May;30(3):437-443.
Fluor594
Fluor594 는 Fluor568 구조를 기반으로 메틸화된 로다민 화합물입니다. 두 개의 황산 이온 또한 염료의 특성을 최적화하는 역할을 합니다. 여기될 때 밝은 적색 형광을 방출하며, 매우 민감하고 안정적이며 저농도 표적을 검출하는 데 사용될 수 있습니다. Fluor594 는 우수한 수용성 작은 분자 형광 표지 염료로, 다양한 표적 분자를 표지하는 데 적합하며 다양한 생물학적 실험에 널리 사용됩니다. Fluor594 염료로 준비된 접합체는 스펙트럼 적색 영역에서 형광을 방출하므로, 녹색 형광 프로브와 결합한 다중 표지 실험에 특히 적합합니다. Fluor594 의 스펙트럼 특성은 Cyanine3.5 와 Texas Red 에 유사하지만, 형광 강도가 더 강력하여 Texas Red 를 훌륭한 대안으로 만듭니다.
적용 참고문헌:
- Arcangeli, A.; Becchetti, A.; Pillozzi, S.; Masselli,M.; De Lorenzo, E. 백혈병 형태의 화학 저항성 예방 및/또는 모니터링을 위한 방법 및 키트. PCT Int. Appl. WO 2011058509,2011.
- Green, D. P. L.; Rawle, C. B. 분석 시스템 및 방법.PCT Int. Appl. WO 2009082242, 2009.
- N Panchuk-Voloshina , R P Haugland, J Bishop-Stewart. Alexa 염료, 매우 밝고 광 안정적인 접합체를 생성하는 새로운 형광 염료 시리즈.J Histochem Cytochem. 1999 Sep;47(9):1179-88.
Fluor647
Fluor647 형광 염료의 스펙트럼은 Cyanine5 와 거의 완전히 일치하므로, Cyanine5 를 위한 광 필터와의 호환성도 최적일 수 있습니다. 그러나 Fluor647 항체 접합체의 전체 형광 강도는 일반적으로 Cyanine5 접합체보다 훨씬 더 큽니다. 또한, 대부분의 단백질, 올리고뉴클레오티드 및 핵산과 결합될 때 Fluor647 의 흡수 또는 형광 스펙트럼은 거의 변화가 없으므로, 동일한 치환도에서 전체 형광 강도가 더 높아 Cyanine5 를 훌륭한 대안으로 만듭니다.
적용 참고문헌:
- Liming Ou, Qingyu Lv, Canjun Wu, Huaijie Hao. 인간 혈청 시료에서 Mycoplasma pneumoniae 특정 IgM 의 빠른 검출을 위한 측류 면역 크로마토그래피 분석법 개발.J Microbiol Methods. 2016 May:124:35-40.
- N Panchuk-Voloshina , R P Haugland, J Bishop-Stewart. Alexa 염료, 매우 밝고 광 안정적인 접합체를 생성하는 새로운 형광 염료 시리즈.J Histochem Cytochem. 1999 Sep;47(9):1179-88.
- Ryo Tsumura , Ryuta Sato , Fumiaki Furuya. 조직 인자 (tissue factor) 에 대한 단클론 항체의 Fab 절편을 진단 도구로 사용하는 타당성 연구.Int J Oncol. 2015 Dec;47(6):2107-14.
- photostability 비교: Alexa Fluor 448 와 Alexa Fluor 647 와 기존 염료 FITC 및 APC 를 세포분획법으로.Int J Lab Hematol. 2018 Jun;40(3):e52-e54.
Fluor680
Fluor680 염료의 피크 여기 파장은 680nm 이며, 최대 방출 파장은 702nm 입니다. 그 스펙트럼 특성은 Cyanine5.5 염료와 유사합니다. Fluor680 염료의 형광은 다른 일반적으로 사용되는 적색 형광 물질 (테트라메틸로다민, R-phycoerythrin, Fluor594, 그리고 Fluor647) 의 방출 신호에서 명확하게 분리되어 있어 다색 표지에 매우 적합합니다.
적용 참고문헌:
- Ogawa, M.; Regino, C. A.; Choyke, P. L.; Kobayashi,H. 인간화 단클론 항체의 in vivo 목표 특이 활성화 근적외선 광 표지.Mol. Cancer Ther. 2009, 8, 232--239.
- N Panchuk-Voloshina , R P Haugland, J Bishop-Stewart. Alexa 염료, 매우 밝고 광 안정적인 접합체를 생성하는 새로운 형광 염료 시리즈.J Histochem Cytochem. 1999 Sep;47(9):1179-88.
Fluor750
Fluor750 은 스펙트럼적으로 Cyanine7 염료와 매우 유사하며, Cyanine7 의 훌륭한 대안입니다. 최대 형광 방출 파장은 770nm 으로, 일반적으로 사용되는 원적색 형광 물질 (Fluor647 또는 APC) 의 최대 방출 파장보다 멀어 다색 분석에 편리합니다.
적용 참고문헌:
- Paris-Robidas, S.; Emond, V.; Tremblay, C.; Soulet,D.; Calon, F. in vivo 전수 수용체 (transferrin receptor) 에 대한 단클론 항체를 정맥 주사 후 뇌 모세혈관 내피 세포 표지.Mol. Pharmacol. 2011, 80, 32--39.
- Paudyal, P.; Paudyal, B.; Iida, Y.; Oriuchi, N.;Hanaoka, H.; Tominaga, H.; Ishikita, T.; Yoshioka,H.; Higuchi, T.; Endo, K. PET 과 광 이미징을 위한 CD20 표적 이중 기능 분자 이미징 프로브.Oncol. Rep. 2009, 22, 115--119.
- Moinuddin Hassan 1, Victor Chernomordik, Rafal Zielinski.in vivo HER2 발현 변화 모니터링을 위한 근적외선 형광 이미징 방법.Mol Imaging.2012 Jun;11(3):177-86.
 | Hansun Hansun 은 EnkiLife 의 단백질 표지 전문가로, 면역학, 다양한 표지 기술, 세포분획 분석에 숙련되어 있습니다. 우리는 과학기술적 돌파구를 위한 정확한 단백질 표지를 위해 헌신하고 있습니다. 모든 단백질은 "보여질" 자격이 있습니다. |