ELISA 조작 수순

조작 절차

• 항체 코팅: 실험 필요에 따라 탄산 완충액（CBS） 또는 인산완충식염수（PBS）를 사용해 코팅 항체를 필요한 희석 배율로 희석합니다. 웰당 100μL를 코팅한 후 37°C에서 2시간 또는 4°C에서 하룻밤 인큐베이션합니다.
• 웰 내 액체를 버리고 건조시킨 후, 10 mM PBST（10 mM PBS + 0.05% Tween-20）로 2회 세척합니다. 매회 1-2분간 담가둔 후 웰당 350μL를 사용하고 건조시킵니다 (웰 내 액체를 가볍게 두드려 제거해도 됩니다).
• 1% BSA 또는 5% 탈지분유를 함유한 10 mM PBST（10 mM PBS + 0.05% Tween-20）로 블로킹합니다. 웰당 350-400μL를 사용하고 37°C에서 2시간 인큐베이션합니다.
• 플레이트 세척: 2단계를 따릅니다.                참고: 시판 키트의 ELISA 플레이트는 일반적으로 포획 항체가 미리 코팅되어 있으므로 1-4단계는 일반적으로 필요하지 않습니다. 사용 전 확인해주십시오.
• 샘플 첨가: 블랭크 웰, 표준 웰, 샘플 웰을 설정합니다. 블랭크 웰에는 100μL의 샘플 희석액을 첨가하고, 나머지 웰에는 100μL의 표준액 또는 샘플을 첨가합니다.                참고: 거품을 피하고 샘플을 웰 바닥에 첨가하되 웰 벽에 닿지 않도록 하십시오. 한 장의 플레이트에 샘플 첨가는 10분 이내에 완료해주십시오.                ELISA 플레이트에 뚜껑이나 필름을 씌우고 37°C에서 60-120분간 인큐베이션합니다. 실험 결과의 유효성을 확보하기 위해 매번 새로운 표준 용액을 사용해주십시오.
• 웰 내 액체를 버리고 건조시킨 후, 10 mM PBST（10 mM PBS + 0.05% Tween-20）로 4회 세척합니다. 매회 1-2분간 담가둔 후 웰당 350-400μL를 사용하고 건조시킵니다 (웰 내 액체를 가볍게 두드려 제거해도 됩니다).
• 검출 항체 첨가: 실험 요구 사항에 따라 PBST로 검출 항체를 일정한 희석 배율로 희석한 후, 웰당 100μL를 첨가하고 37°C에서 1시간 인큐베이션합니다.
• 플레이트 세척: 6단계와 동일합니다.
• 이차 항체 첨가: 10 mM PBST로 이차 항체를 필요한 희석 배율로 희석한 후, 웰당 100μL를 첨가하고 37°C에서 1시간 인큐베이션합니다.
• 플레이트 세척: 6단계와 동일합니다.
• TMB 첨가: 각 웰에 100μL의 TMB 기질 용액을 첨가한 후, 37°C 암소에서 10-30분간 인큐베이션합니다 (과도한 발색을 막기 위해 실험 요구 사항에 따라 시간을 조절해주십시오).
• 정지액 첨가: 발색이 예상 수준에 도달한 후（예: 표준 웰에 농도 구배에 따른 색상이 나타난 경우）, 각 웰에 50μL의 정지액（예: 2M 시트르산）을 첨가하여 효소 반응을 정지시킵니다 (이 시점에서 파란색이 노란색으로 변합니다).
• ELISA 측정: 630 nm를 교정 파장으로 사용하고, ELISA 리더기로 각 웰의 흡광도(OD 값)를 450 nm에서 순서대로 측정합니다. 정지액 첨가 후 5분 이내에 값을 읽어주십시오.