ELISA 조작 수순

실험 절차

• 항체 코팅: 실험 필요에 따라 탄소 이온 완충액 (CBS) 또는 인산 버퍼 생리 식염수 (PBS) 를 사용하여 항체를 필요한 희석도로 희석하세요. 웰당 100 μL 로 코팅하고, 37°C 에서 2 시간 동안 인큐베이션하거나 4°C 에서 밤새도록 인큐베이션하세요.
• 웰의 액기를 제거하고 건조한 후, 10 mM PBST (10 mM PBS + 0.05% Tween-20) 로 웰당 350 μL 씩 세 번 세척하며 각각 1-2 분 동안 침지합니다 (액기를 부드럽게 톡톡 치켜서 제거할 수도 있습니다).
• BSA 1% 또는 탈지 우유 5% 를 포함하는 10 mM PBST 로 블로킹합니다. 웰당 350-400 μL 사용, 37°C 에서 2 시간 동안 인큐베이션하세요.
• 플레이트 세척: 2 단계에 따라 진행하세요.            참고: 상용 키트는 일반적으로 ELISA 플레이트에서 포착 항체가 미리 코팅되어 있으므로 1-4 단계는 일반적으로 필요 없습니다. 사용 전 확인하세요.
• 샘플 추가: 제로 웰, 표준 웰, 샘플 웰을 설정합니다. 블랭크 웰에는 샘플 희석액 100 μL 를 넣고 나머지 웰에는 표준 또는 샘플 100 μL 를 넣습니다            참고: 거품 방지, 웰 바닥에 샘플을 추가하고, 웰 벽을 피하며, 한 플레이트의 샘플 첨가를 10 분 이내에 완료하세요.            효소 결합 면역흡착 분석 (ELISA) 플레이트를 덮개나 필름으로 덮고, 37°C 에서 60-120 분 동안 인큐베이션하세요. 실험 결과의 유효성을 보장하기 위해 각 실험마다 새로운 표준 용액을 사용하세요.
• 웰의 액기를 제거하고 건조한 후, 10 mM PBST (10 mM PBS + 0.05% Tween-20) 로 플레이트를 4 번 세척하며 각각 1-2 분 동안 침지합니다. 웰당 350-400 μL 사용 후 건조하세요 (액기를 부드럽게 톡톡 치켜서 제거할 수도 있습니다).
• 검출 항체 추가: 실험 요구사항에 따라 PBST 로 검출 항체를 특정 희석도로 희석하고, 웰당 100 μL 를 넣고 37°C 에서 1 시간 동안 인큐베이션하세요.
• 플레이트 세척: 6 단계와 동일하게 진행합니다.
• 2 차 항체 추가: PBST 로 2 차 항체를 필요한 희석도로 희석하고, 웰당 100 μL 를 넣고 37°C 에서 1 시간 동안 인큐베이션하세요.
• 플레이트 세척: 6 단계와 동일하게 진행합니다.
• TMB 추가: 각 웰당 TMB 기질 용액 100 μL 를 넣고, 37°C 에서 어둠 속에서 10-30 분 동안 인큐베이션하세요 (실험 요구사항에 따라 색 발색을 과도하게 방지하기 위해 시간 조절).
• 정지 용액 추가: 색 발색이 예상 수준에 도달했을 때 (예: 표준 웰에서 그라데이션 색상 나타남), 각 웰당 50 μL 의 정지 용액 (예: 2M 시트르산) 을 추가하여 효소 반응을 종료합니다 (이때 파란색이 노란색으로 변함).
• ELISA 판독: 630 nm 를 보정 파장으로 사용하여, ELISA 리더를 통해 450 nm 에서 각 웰의 흡광도 (OD 값) 을 순서대로 측정합니다. 정지 용액을 추가한 후 5 분 이내에 값을 읽어보세요.