아래에 나열된 ELISA 시료 수집 및 저장 조건은 일반적인 지침으로 의도되었습니다. 특정 프로토콜은 세포 라인 또는 조직 유형에 따라 다를 수 있습니다. 장기간 시료를 보관할 경우, 시료 안정성을 테스트하는 것이 권장됩니다. 모든 유형의 시료에서 반복적인 동결-해동 주기를 피하세요.
혈청
혈청 분리관 (SST) 을 사용하며, 실온에서 30 분 동안 응고 후 원심분리를 위해 15 분 동안 1000 x g 에서 원심분리하세요. 혈청을 제거하고 즉시 분석하거나 분할하여 시료를 ≤ -20 °C 에서 보관하세요.
혈장
EDTA, 헤파린, 또는 시트르를 항응고제로 사용하여 혈장을 수집하세요. 수집 후 30 분 이내에 15 분 동안 1000 x g 에서 원심분리하세요. 즉시 분석하거나 분할하여 시료를 ≤ -20 °C 에서 보관하세요.
무혈소판 혈장
EDTA, 헤파린, 또는 시트르를 항응고제로 사용하여 혈장을 수집하세요. 수집 후 30 분 이내에 15 분 동안 1000 x g 에서 원심분리하세요. 완전한 혈소판 제거를 위해 혈장에 대한 추가적인 원심분리 단계가 권장되며, 10,000 x g 에서 2-8 °C 로 10 분간 원심분리합니다. 즉시 분석하거나 분할하여 시료를 ≤ -20 °C 에서 보관하세요.
세포 배양 상층액
입자를 제거하기 위해 5 분 동안 500 x g 로 원심분리하세요. 상층액을 제거하고 즉시 분석하거나 분할하여 시료를 ≤ -20 °C 에서 보관하세요.
조직 균질화물
조직 균질화의 준비는 조직 유형에 따라 다를 것입니다. 1X PBS 로 조직을 헹구하여 과잉 혈액을 제거하고, 20 mL 의 1X PBS 에서 균질화한 후 ≤ -20 °C 에서 밤새 보관하세요. 세포막을 깨기 위해 두 번의 동결-해동 주기가 수행된 후, 균질화물을 5 분 동안 5000 x g 로 원심분리합니다. 상층액을 즉시 제거하고 분석하거나 대체로 분할하여 시료를 ≤ -20 °C 에서 보관하세요.
세포 용해물
셀을 용해 완충液中에 용해시키고 얼음 위에 두기 30 분 동안 대기하세요. 불용성 물질을 제거하기 위해 튜브를 5 분 동안 14,000 x g 로 원심분리합니다. 상층액을 새 튜브로 분할하고 나머지 전체 세포 추출물을 폐기하세요. 총 단백질 농도를 정량화하기 위해 총 단백질 분석을 사용하세요. 즉시 분석하거나 분할하여 시료를 ≤ -20 °C 에서 보관하세요.
조직 용해물
PBS 로 조직을 헹구하고 1-2 mm 조각으로 잘라 PBS 에 조직 균질화기로 균질화하세요. 프로테아제 억제제가 포함된 RIPA 완충액과 동일한 부피를 추가하고 실온에서 30 분 동안 경미한 교반으로 조직 용해합니다. 잔여물을 제거하기 위해 원심분리하세요. 총 단백질 농도를 정량화하기 위해 총 단백질 분석을 사용하세요. 즉시 분석하거나 분할하여 시료를 ≤ -20 °C 에서 보관하세요.
타액
튜브에 타액을 수집하고 5 분 동안 10,000 x g 로 원심분리하세요. 수용성 층을 수집하고 즉시 분석하거나 분할하여 시료를 ≤ -20 °C 에서 보관하세요.
소변
무균적으로 하루 첫 번째 소변을 (중류) 수집하여 멸균 용기에 직접 배출하세요. 입자 물질을 제거하기 위해 원심분리하세요. 즉시 분석하거나 분할하여 시료를 ≤ -20 °C 에서 보관하세요.
인간 우유
15 분 동안 2-8 °C 로 1000 x g 로 원심분리하세요. 수용성 분획을 수집하고 이 과정을 총 3 번 반복하세요. 즉시 분석하거나 분할하여 시료를 ≤ -20 °C 에서 보관하세요.
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