아래에 제시된 ELISA 샘플의 수집 및 보관 조건은 일반적인 가이드라인으로 제공됩니다. 구체적인 프로토콜은 세포주 또는 조직 종류에 따라 다를 수 있습니다. 샘플을 장기간 보관해야 하는 경우 샘플의 안정성을 확인하는 것을 권장합니다. 모든 샘플 유형에 대해 반복적인 동결-해동 사이클은 피해주십시오.
혈청
혈청 분리 튜브(SST)를 사용하여 실온에서 30분간 응고시킨 후 1000 x g에서 15분간 원심분리합니다. 혈청을 꺼내 즉시 분석을 진행하거나 분할하여 ≤ -20 °C에서 보관합니다.
혈장
EDTA, 헤파린 또는 구연산을 항응고제로 사용하여 혈장을 채취합니다. 채취 후 30분 이내에 1000 x g에서 15분간 원심분리합니다. 즉시 분석을 진행하거나 분할하여 ≤ -20 °C에서 보관합니다.
혈소판 제거 혈장
EDTA, 헤파린 또는 구연산을 항응고제로 사용하여 혈장을 채취합니다. 채취 후 30분 이내에 1000 x g에서 15분간 원심분리합니다. 혈소판을 완전히 제거하기 위해 혈장을 2-8 °C에서 10,000 x g로 10분간 원심분리하는 추가 공정을 권장합니다. 즉시 분석을 진행하거나 분할하여 ≤ -20 °C에서 보관합니다.
세포 배양 상등액
500 x g에서 5분간 원심분리하여 미립자를 제거합니다. 상등액을 꺼내 즉시 분석을 진행하거나 분할하여 ≤ -20 °C에서 보관합니다.
조직 균질액
조직 균질액의 제조는 조직 종류에 따라 다릅니다. 여분의 혈액을 제거하기 위해 조직을 1X PBS로 헹군 후 20 mL의 1X PBS로 균질화하여 ≤ -20 °C에서 하룻밤 보관합니다. 세포막을 파괴하기 위해 2회의 동결-해동 사이클을 진행한 후 균질액을 5000 x g에서 5분간 원심분리합니다. 상등액을 즉시 꺼내 분석을 진행하거나 분할하여 ≤ -20 °C에서 보관합니다.
세포 용해물
세포를 용해 버퍼에 용해시킨 후 얼음 위에서 30분간 방치합니다. 14,000 x g에서 5분간 원심분리하여 불용성 물질을 제거합니다. 상등액을 새로운 튜브에 분주하고 남은 전체 세포 추출물은 폐기합니다. 전체 단백질 분석을 사용하여 전체 단백질 농도를 정량합니다. 즉시 분석을 진행하거나 분할하여 ≤ -20 °C에서 보관합니다.
조직 용해물
조직을 PBS로 헹구고 1-2 mm 조각으로 자른 후 PBS 내에서 조직 균질기를 사용하여 균질화합니다. 프로테아제 저해제를 포함하는 RIPA 버퍼를 같은 양 넣고 실온에서 30분간 부드럽게 교반하여 조직을 용해시킵니다. 원심분리하여 찌꺼기를 제거합니다. 전체 단백질 분석을 사용하여 전체 단백질 농도를 정량합니다. 즉시 분석을 진행하거나 분할하여 ≤ -20 °C에서 보관합니다.
타액
타액을 튜브에 채취한 후 10,000 x g에서 5분간 원심분리합니다. 수층을 회수하여 즉시 분석을 진행하거나 분할하여 ≤ -20 °C에서 보관합니다.
소변
아침 첫 소변(중류뇨)을 무균적으로 채취하여 무균 용기에 직접 배출합니다. 원심분리하여 미립자를 제거합니다. 즉시 분석을 진행하거나 분할하여 ≤ -20 °C에서 보관합니다.
모유
2-8 °C에서 1000 x g로 15분간 원심분리합니다. 수층을 회수하여 이 과정을 총 3회 반복합니다. 즉시 분석을 진행하거나 분할하여 ≤ -20 °C에서 보관합니다.
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